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龙军真菌讲稿4
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2021
答辩：
导师：T
组织病理学检查
侵袭性曲霉感染：
－侵犯血管，引起病变部位的栓塞、出血及坏死
－非特异性炎症、化脓性改变或肉芽
产孢丝状真菌的液基稀释法抗真菌药敏试验参考方案（Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Conidia-Forming Filamentous Fungi）
提出的标准方法，微量稀释法
主要适用于：如曲霉、镰刀菌、米根霉、波氏假阿利什霉、申克孢子丝菌（菌丝相）等。
我们已根据此法，进行了皮肤癣菌的药敏试验
2003年推出M38-A方案
M44-A方案
2004年CLSI出版了<对酵母菌的纸片扩散法抗真菌药物敏感试验参考方案>
使用美蓝MH琼脂平板，纸片为Rosco公司生产的各种抗真菌药物纸片
M27-A2药敏判读
对于酵母菌（念珠菌、新型隐球菌，不适用于其他真菌）：
***康唑:35度、40-50h(隐球菌70-74h) ，与生长对照菌比较80%受抑制为判定点
如MIC≤8μg/ml报告敏感， ≥64μg/ml报告耐药， 16-32μg/ml则是剂量依赖敏感
光滑、克柔不适用
M27-A2药敏判读
伊曲康唑的MIC定义同***康唑
如MIC ≤,提示受试黏膜感染的念珠菌敏感，如≥1μg/ml报告耐药
—
目前无黏膜外的侵袭性念珠菌感染的折点判定标准
M27-A2药敏方案的临床意义1）
耐药菌株的鉴定与监测：
• 念珠菌对FCZ的耐药问题日益严重
• AIDS患者经FCZ治疗后出现较多白念珠菌的耐药株
• MIC值升高，随FCZ剂量增大
• 分子生物学方法可证实同一菌株产生耐药
M27-A2药敏方案的临床意义(2）
拓展新的药敏试验方法：
• 微量稀释法、E-test法等均以M27-A为基
础，从不同角度为临床提供更简捷，易推
广的药敏试验技术
M27-A2药敏方案的临床意义(3)
应用于抗真菌新药的研究
• 评估新的抗真菌药物的抗真菌效果
• 扩展到丝状真菌药敏试验
• 以此为基础，对曲霉、镰刀霉、根霉、波氏霉样真菌、孢子丝菌已形成M38-A方案（2003年），但皮肤癣菌还有待纳入
体外抗真菌药敏试验与体内疗效的一致性
NCCLS M27-A
• 90-60原则－－MIC值与临床疗效
药敏试验敏感菌株：90%对治疗有效
药敏试验耐药菌株：60%对治疗有效
NCCLS对药敏结果的解释
MIC不是一个物理或化学的指标
• 在实际临床治疗中，宿主因素往往比药敏试验结果更为重要
• 体外药敏结果敏感并不预示治疗成功
• 体外的耐药常预示治疗失败
产孢丝状真菌抗真菌药敏试验NCCLS方案 M38－A简介
M38-A，微量肉汤稀释法适用于曲霉属、镰刀霉属、结合菌、赛多孢属、孢子丝菌等丝状真菌。
• 该方案仅对试验条件和判读标准进行
了统一，并没有给出M IC的判定折点
药敏判读
在终点判读时，将伊曲康唑由原方案的５０％生长抑制改为１００％生长抑制，即读数为０时的最低药物浓度• 新型三唑类药物的MIC值定义也是如此• 原因是伊曲康唑和其他新型三唑类药物，与***康唑和***康唑不同，判读终点时不存在拖尾• 质控菌株增加了：-黄曲霉ATCC204304-烟曲霉ATCC204305
药敏判读
丝状真菌对***霉素B 的M IC -2 mg/L,但是部分真菌(如:土曲霉、枝顶孢霉、尖端赛多孢霉、足分支霉) MIC 可能超2mg/L。一般认为,MIC >2 mg/L,***霉素B治疗有可能失败。• 丝状真菌通常对5-FC和***康唑不敏感,MIC往往大于64 mg/L。
丝状真菌常侵袭组织, MIC和药物组织浓度的关系对于临床治疗指导意义更大
药敏判读
因此,目前对于丝状真菌的体外诊断,更有意义的不是药敏试验,而是仔细地将致病真菌鉴定到种• 举例说明:如果分离到土曲霉、尖端赛多孢霉、足分支霉,就知道这些真菌通常对***霉素B耐药
纸片扩散法
将含有一定量抗真菌药物的纸片置于接种有一定量真菌的平皿中，在一定的温度经过一定时间孵育后，通过测量抑菌圈的大小来判断受试真菌对于该药物的敏感性• 该方法简单直观，已有商品化• 缺点：不能精确量化
酵母菌纸片扩散法敏感试验 (CLSI)M44-P
M44-P 酵母菌纸片扩散法敏感试验方案，制定了***康唑(fluconazole)和沃尔康唑(voriconazole)质控株的参考范围及***