茶多酚含量测定.docx

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李玲主编
科学出版社
茶多酚含量的测定方法(分光光度计法)
【实验目的】
学****用酒石酸铁比色法测定茶多酚含量的方法,了解茶多酚在植物抗氧化活性中的作用。
【实验原理】
茶多酚是一类儿茶素为主体的类黄***化合物,具有C6—C3—C6碳骨架结构,是一种重要的天然抗氧化性物质。它是超氧阴离子自由基和羟自由基的强捕获剂,能清除自由基。本实验介绍用酒石酸铁比色法测定植物组织中的茶多酚含量。
【器材与试剂】
实验仪器与用具
分光光度计、离心机、研钵、水浴锅、移液管、烘箱、具塞三角瓶

()
100Ag/ml儿茶素标准液:称取10mg儿茶素,用蒸馏水定容至100ml。
%酒石酸钾铁

同抗坏血酸。
【实验操作】
,研磨成粉末。用50ml沸蒸馏水将粉末洗入三角瓶,于沸水浴中浸提20min,过滤,滤渣用50ml蒸馏水同样提取一次,合并上清液,5000g离心15min,取上清液待用。
将儿茶素标准溶液稀释成0、20、40、60、80、100yg/ml,分别吸取1ml,,混匀,%酒石酸钾铁1ml,用分光光度计测定540nm处的OD值,并绘制浓度-OD标准曲线。
取样品提取液1ml,按上述同意方法测定540nm处的OD值。
【实验作业】
根据公式,计算植物幼叶和成熟叶中茶多酚的含量,分析原因。
茶多酚含量(pg/g鲜重)=CX(提取液总体积X体积稀释倍数)
式中,C为从标准曲线中查得提取液中茶多酚含量(yg/ml)。
【注意事项】
提取时间过长,所提的茶多酚会发生氧化反应,转化成其他物质,致使一部分茶多酚丢失。提取时间在1~2h对茶多酚含量的影响不大。
【实验扩展】
可以从提取容积的选择以及萃取环节等方面,优化从植物组织高效率提取茶多酚含量的方法。
根据茶多酚易溶于水、乙醇、乙酸乙酯等性质,本实验用溶剂萃取法从茶叶制备多酚标准品,其方法是:取茶叶粉末,加6倍量沸水提取30min,不断搅拌,过滤。滤液加适量三***化铁,边搅拌边滴加1mol/LNaHCO3,以滴入NaHCO3不再出现出现沉淀为止。离心,收集沉淀,用5mol/L盐酸(1ml浓盐酸加水1ml)溶解,加入等体积乙酸乙酯萃取,浓缩,真空干燥,则得到近白色的茶多酚。