厌氧菌的分离和鉴定.pptx

厌氧菌分离与判定
卫生部北京医院
陈东科
厌氧菌的分离和鉴定
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厌氧菌检验是临床微生物检验主要组成部分。在无氧（或少氧）条件下，或氧化还原电势低条件下才能繁殖细菌称为厌氧菌。因为厌氧菌在人体肠道、口腔、泌尿和鉴定
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5. 提供可靠厌氧环境
使用厌氧罐法、厌氧袋法或厌氧箱法。在厌氧培养中必须使用氧化还原指示剂，普通采取亚***美兰或刃天青，每次要新鲜配制。假如能在孵育整个过程中维持厌氧条件，指示剂溶液将无色，不然指示剂则变色。
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6. 标本接种与孵育
（1）拭子和液体标本直接接种固体和液体培养基（需氧和厌氧培养各一份），在厌氧平板上贴一片灭滴灵纸片（5μg/片），置35℃培养。同时做直接涂片革兰染色镜检。用铂-铱合金环（不用镍-铬合金环，因为它可氧化接种物）三区划线接种平板，以确保长出单个菌落。
（2）若被检标本是组织块，则立刻将其移入无菌组织研磨器内，用硫乙醇酸盐混合研碎，最好在厌氧箱内或无氧条件下操作。组织匀浆接种同液体标本。
（3）可疑含有芽胞梭菌标本，还要用乙醇或加热处理后再行接种。
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7. 直接涂片检验
当有足够标本或收到两个拭子时，最好在接种前做涂片革兰染色镜检，检验结果可提醒需要接种哪些培养基（非常规使用）。涂片检验可看出有没有细菌，微生物类型和大约数量以及芽胞、形状和位置（芽胞梭菌）、着色情况及菌体特征。对血性液体或浓稠分泌物用丫啶橙染色比革兰染色较易观察。这些初步结果应该及时向主管医生汇报，以帮助他们正确选取抗菌药品。涂片检验可查对培养结果是试验室质量控制一个主要指标。
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8. 厌氧菌判定
（1）灭滴灵纸片周围出现抑菌环说明有厌氧菌生长（绝大多数专性厌氧菌对灭滴灵敏感，兼性厌氧菌耐药）。
（2）耐氧试验：接种BRBA平板（需氧厌氧各放一块）及巧克力平板（置CO2条件下）。
（3）革兰染色：依据菌落和菌体形态、染色特征可初步判定。
（4）抗生素敏感性判定：BRBA平板上分区划线接种，第一划线区贴多粘菌素（10μg/片）、卡那霉素（1000μg/片）和万古霉素（5μg/片）。厌氧菌纯培养抑菌环直径>=10mm为敏感。
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表1 Ⅱ级水平试验室革兰阴性厌氧菌群、属、种判定
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厌氧菌种类 细胞 卡那 万古 多粘 20% 靛基质 脂酶 ***盐 尿素酶 动力 凹痕 砖红色
形态 霉素 霉素 菌素 胆汁 还原 荧光
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脆弱类杆菌群 B R R R + V — —
其它类杆菌 B R R V — V — —+ —
产色素杆菌. R V V — V V
CB/B R R S — + +- +-
P loescheii R R V — — —+
类解脲类杆菌群