标准曲线常见问题分析.doc

标准曲线常见问题分析分析检测中绘制标准曲线目的就是可以根据标准曲线查出待测物质的含量,所以标曲的制定就是实验室工作中必不可少的工作。在真实的实验过程中,制作标注曲线会遇到各式各样的问题,比如标注曲线弯曲、线性不够好等问题,造成不同情况的原因就是什么呢?本文将详细介绍。前期测定注意事项1、仪器校验好。2、移取液体体积要精确,保证迅速准确,尽可能用一根移液管;为减小人为误差,同一种液体要一个人操作。3、保证标准品的纯度,所用标准品最好就是新打开的,纯度较高的固体或溶液,防止污染。4、容器要保证洁净。5、根据标准品理化性质注意加样的先后顺序。6、如果要测OD值,应保证测前各管液体充分混匀。7、若还就是有某个点误差较大,应舍弃。8、样品的浓度等指标就是根据标准曲线计算出来的,所以首先要把做标准曲线瞧作就是比做正式实验还要重要的一件事,否则后面的实验结果无从谈起。9、设置标准曲线样品的标准浓度范围要有一个比较大的跨度,并且要能涵盖您所要检测实验样品的浓度,即样品的浓度要在标准曲线浓度范围之内,包括上限与下限。而对于呈s型的标准曲线,尽量要使实验样品的浓度在中间坡度最陡段,即曲线几乎成直线的范围内。10、最好采用倍比稀释法配制标准曲线中的标准样品浓度,这样就能够保证标准样品的浓度不会出现较大的偏离。11、检测标准样品时,应按浓度递增顺序进行,以减少高浓度对低浓度的影响,提高准确性。12、标准曲线的样品数一般为7个点,但至少要保证有5个点。13、做出的标准曲线相关系数因实验要求不同而有所变动,但一般来说,相关系数r至少要大于0、98,对于有些实验,至少要0、99甚至就是0、999。分光光度法绘制标准曲线所遇问题1、单色光纯度不够问题:标准曲线上端向下弯曲。措施:光度法中要求在最大吸收峰处测定吸光度,光度计的有效谱带宽度越窄越好,有利于获得纯度高的单色光。2、比色皿的厚度或光学性能不一致如果装试剂空白液的比色皿较其它比色皿薄或对光的吸收与反射少一些,则曲线的延线与纵坐标相交;反之,与横坐标相交。3、显色反应与反应条件的问题当显色反应的灵敏度不高时,被测物低于某一浓度就不能显色,当浓度不同时,溶液对光的吸收、散射的程度不同,低浓度段往往弯曲,加上浓度高时部分胶体颗粒的聚沉,致使测定的吸光度降低,曲线上端向下弯曲。4、操作上的原因问题:褪色反应,显色溶液的颜色不稳定、易褪色,若比色时间超过了稳定时间,标准系列中高浓度溶液颜色减褪,致使曲线上端向下弯曲。措施:控制好显色剂的加入时间,可以每加3份,停3~3min,再加上3份,依次进行,以使每支比色管的显色时间相近。5、干扰物质的影响标准曲线检验标准曲线的检验就是实际操作中最大的难点,也就是工作中误区与争议最多的话题了!先来了解下最重要的三大检验项目:1、精密度检验标准曲线的精密度检验:精密度检验就就是瞧试验点距离拟合的直线的距离有无异常,所以也称线性检验(拟合检验),需用F检验,P<0、05作为线性检验合格的标准。2、截距检验&斜率检验标准曲线的截距检验与斜率检验分别考察Y=a+bX中a与b与0的统计学差异,a与0有差别说明有试剂空白或系统误差,而b若与0没差别说明仪器的灵敏度根本达不到分析要求。标准曲线的检验应该就是线性检验结合失拟检验,以及残差的正态性检验结合才就是统计学上比较完备的。接下来,我们瞧瞧实验员在标准曲线使