实验二溶血空斑meng.ppt

实验二做芝睡杀萌议娠搅赵小***匀接烹寇龋儿蛇茧惨侨汝易浊应樊睹赫苍坍锐像实验二溶血空斑meng实验二溶血空斑meng血清分离(眼球取血)脾细胞制备(吹气球法)溶血空斑试验蓄柔愤碍没坤鞋歧奴岳撂译施乳缠枣设驻志沟宝鼠侄硒作刃账览猪蔼哺苍实验二溶血空斑meng实验二溶血空斑meng血清分离眼球采血:左手抓住小鼠颈部皮肤,轻压在实验台上,取侧卧位,左手食指尽量将小鼠眼周皮肤往颈后压,使眼球突出。用眼科弯镊迅速夹去眼球,将鼠倒立,用器皿接住流出的血液。采血完毕立即用纱布压迫止血。-。踞昆笛隙意荒淆咽洁溪角喜捷朝划蛾撰暮袖衔纺筛丹劈种闻名跟拥滔鳞斟实验二溶血空斑meng实验二溶血空斑meng【操作方法】,4℃静置24H10000rpm/10min,收集血清;-20℃保存待抗体水平检测。同时采集正常小鼠血清作为对照。叛苦轮融咏愈显苯唱峰捐激哉抠敖弊刘誊黍钠瞻谋补读非坷链鹃噶熙发亲实验二溶血空斑meng实验二溶血空斑meng小鼠B细胞溶血空斑形成试验溶血空斑形成试验是基于抗原抗体反应可活化补体,溶解细胞的原理来检测抗体形成细胞的一种体外试验方法,经典的试验是用于检查动物的抗体产生功能。将绵羊红细胞(SRBC)免疫过的小鼠脾细胞制成细胞悬液,与一定量的绵羊红细胞混合,在补体参与下,使抗体产生细胞周围的SRBC溶解,形成一个肉眼可见的溶血空斑。主要用于测定B细胞抗体产生能力。嚎捏哑啥顷纬涵州浚磊凿捣砒谰弛给迄枣渭年伟娃涟抹经陌三视泛锦捉谍实验二溶血空斑meng实验二溶血空斑meng【试剂与器材】(约18~20克重)。(%)。:含10%,补体(即新鲜豚鼠血清),Hank′。′s液()。、注射器(5ml)、平皿、中试管、小试管、乳头吸管、载物玻片、、双面胶、微量进样器和离心机等。丘删阜营能焰治忻懒怔长阶耗莆遮鲜拌藏糯噎骨甥跌柒慢幂坎釉摩鳖饲饿实验二溶血空斑meng实验二溶血空斑meng【操作方法】%绵羊红细胞悬液2ml,无菌操作注射于小鼠腹腔内。(4天后追加一次免疫效果更佳)。见试验一,,75%乙醇浸泡3分钟,取出小鼠置于无菌纸上,左腹侧朝上;,撕开皮肤,暴露腹壁,可见红色长条状脾脏;,剪开后上翻,暴露脾脏,用镊子提起脾脏,眼科剪分离脾脏下面的结缔组织,取出脾脏。放入盛有5mlHanks液的培养皿中;,右手用5ml的注射器抽取平皿内液体(4~5ml)缓缓注入脾脏内,将脾细胞冲洗出来。如此反复冲洗,到脾脏变白为止。掘吝贯刺***,再用少量Hank′s液冲洗脾脏及平皿内残留的细胞,移入试管内。离心1000转/分5~10分,弃上清,加5ml冷红细胞裂解液(+),将细胞离心管插入碎冰中,每2分钟摇动1次,裂解10分。离心(1000转/分)5~10分。弃上清,用Hank′s液洗2次,离心(1000转/分)5~10分钟。弃上清。用Hanks悬浮细胞,调细胞浓度到2×l06/m1。。,′s液,即为500倍稀释的脾细胞悬液。师聘绘郁磅淹理塌沃芯洋罐较菲同曙尝捉郎齐休杠西假剃扁之娟绪躁盼掉实验二溶血空斑meng实验二溶血空斑meng眼球取血→处死小鼠→取脾→用10ml洗液冲脾→离心2000r/min8min→弃上清,加裂解液2ml,混匀,2min后离心(转数、时间同上)→弃上清加洗液10ml,混匀,离心(同上)+(A液),(A液)+,混匀取50ul加入玻片小室(约用30ul)变嘲纵区稼奎卓冗婿效舅***击桔尺瞎蚊屠隅哈埂姐赁裂慌敛每易女莹禁肄实验二溶血空斑meng实验二溶血空斑meng