胚胎干细胞体外分化为神经细胞的探究.pdf

浙江大学
硕士学位论文
胚胎干细胞体外分化为神经细胞的研究
姓名:万小凤
申请学位级别:硕士
专业:遗传学
指导教师:张铭
20040601
摘要�⑿切谓褐氏赴�姆掷肱嘌�材料,制成条件培养液,探讨不同组织来源的细胞条件培养液对��体外诱导神经分化的效率。研究发现不同种属来源的星形胶质细胞制成条件培养液后,对��体外分化为神经细胞影响不同,其中�大鼠源的星形胶质细胞条件培养液的影响细胞,随着诱导时间的延长。上皮样细胞的比例逐渐增多,其中大部分细胞长出神经样突起。而��∈蠛虲�小鼠来源的星形胶质细胞条件培养液诱导效率则很低,��的条件培养液对��体外诱导为神经细胞影响更小;胎肝细胞条件培养细胞也呈多个集落样生长,集落边缘的细胞长出较多神经样突起,细胞间边界清晰,��体外诱导为神经细胞的经典途径是先通过拟胚体阶段以启动分化,再通过�或无血清培养法诱导拟胚体分化为神经细胞。由于拟胚体法得到的细胞异质程度高且分化周期长,对实验者要求也比较高,因此非拟胚体法在近年得到很好的发展。本研究就是运用非拟胚体途径,直接将��诱导分化为神经细胞上皮样细胞。实验以来源于新生大鼠和小鼠的星形胶质细胞、胎肝细胞来制各条件培养液,探讨星形胶质细胞和胎肝细胞分泌的可溶性因子对��逋夥只�I窬�赴�挠�响:探讨丁酸钠对��逋夥只�I窬�赴�淖饔谩Q芯康闹饕D谌萑缦拢�以出生�之内的��∈蟆��小鼠、�大鼠为材料,建立了星形胶质细胞分离培养体系,发现不同种属来源的星形胶质细胞形态有很大不同,不同的培养条件也会造成细胞形态的改变。���小鼠胎肝细胞的分离培养以�.�胎龄的��∈笪2牧希��⒘颂ジ蜗赴�掷肱嘌�逑怠��⑻跫�嘌�旱闹谱骷捌溆盏糆�赴�只�I窬�赴�本研究首次以上述星形胶质细胞、胎肝混合细胞以及���切谓褐柿鱿赴��非常明显,��纯晒鄄斓紼��翁�⑸�浠���%以上的细胞形态变成上皮样液对��体外诱导为神经细胞效果不如�大鼠星形胶质细胞条件培养液明显,但与对照相比,细胞形态又有很大差别,对照呈多个集落样生长,细胞间界限比较清晰,但细胞形态极不规则,�后,细胞边缘平滑。硕士学位论文
胞密度为���个船融果为最佳,此时诱导效率高���阳性率达�%�蚁�关键词:胚胎干细胞;星形胶质细胞;胎肝细胞:星形胶质瘤:条件培养液本研究首次将丁酸钠引入��体外分化为神经细胞的体系。通过比较用不同浓度和时间对不同密度的�����的丁酸钠处理�,�细胞存活率较高��%�M�狈⑾郑�ジ翁跫�嘌�河兄�谔岣呦赴�婊盥省�本方法除了诱导效率高之外,与其他诱导方法相比具有许多优势。首先是它简单方便,��蚑酸钠比��等基质细胞共培养体系简单明了,处理也更方便:其次是耗时短,处理��涂杉鹡�缸�粜韵赴�神经干细胞的标记��纫�前任何一个方法时间都要短:第三,诱导后细胞形态比较单一,因而也解决了分离纯化的难题。神经细胞:丁酸钠�⒍∷崮朴盏糆��逋夥只�I窬�赴�硕士学位论文�
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第一部分文献综述�芯颗咛ジ上赴�逋夥只�囊庖��咛ジ上赴�尘爸J都蚪���在胚胎发生发育学中的运用近�多年里飞速发展。继小鼠�细胞系建立后,人们相继建立了大鼠【��⒅怼璉、自��年���闐�����跹踊鹤糯驳呐吲荨�����用条件培养基分别成牛��、羊⋯、兔【���、苍鼠��⒘槌だ郲���等的�细胞系。因为特异性相似,来细胞分化是发育学的核心问题。在体胚胎发育过程中,组织的发生和身体构造种因子的类型和浓度决定了这些特定基因在特定的时间和位点被选择性地激活。但��,��中未分化的细胞,具有自我更新、高度增殖和多向分化的在体外,分化抑制培养能使��在保持未分化状态下无限增殖,目前通常采用饲养层������或白血病抑制因子���茸