乙肝病毒DNA试验室检测课件.ppt

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袁立云
1
、荧光定量技术
2
、乙肝病毒的感染
3
、与临床
荧光定量技术
荧光定量技术
?
()
,聚合酶链式反应,是一种的快速扩增技术。技术通
过两个短的称为引物的小片段和一种耐热酶(聚合酶)的
作用,经过高温变性、低温退火、适温延伸三个步骤在
3
个小时内反复循环
25-30
次,把特定的片段扩增
1000
万倍
。
?
每个体系含
4
种主要成分:含有待扩增序列的模板、引物
、聚合酶、脱氧核糖核酸三磷酸()
实时荧光定量技术,是指在反应体系中加入荧光标记,
利用荧光信号积累实时检测整个过程,通过标准曲线对终
产物的分析,最终实现对未知的起始模版进行定量分析的
一种技术,是迄今对已知基因序列的核酸测定中最灵敏的
方法。
荧光定量技术
反应过程
5'
5'
3'
3'
酶
反应组分
变
性
延
伸
5'
3'
5'
3'
3'
5'
3'
Taq
Taq
重
复
退
火
5'
3'
3'
3'
3'
5'
3'
3'
5'
3'
3'
循环
2
4
个拷贝
循环
3
8
个拷贝
3'
3'
5'
3'
3'
5'
3'
3'
5'
3'
3'
5'
3'
3'
5'
3'
3'
5'
3'
3'
5'
3'
3'
荧光定量原理
插入染料法
I
杂交探针法
(
最常用
)
探针
5'
5'
3'
3'
酶
反应体系
变
性
Taq
l
5'
3'
R
Q
Probe
5'
3'
R
Q