T淋巴细胞分离技术.doc

T淋巴细胞分离技术
(二)材料及试剂 ( Nylon Wool Fiber)。
、铝箔、漏斗、一次性手套等。 ,一次性注射器。
,过聚蔗糖—泛影葡***分层液后,获取的血浆和分层液之间的单个核细胞层。

(1)戴上已经洗去滑石粉的一次性手套,将尼龙毛(1包或2包,每包35g)放入烧杯中,加入蒸馏水或去离子水,用铝箔盖上烧杯并煮沸约10min。
(2)冷却至常温,倒入漏斗内,使水滴干。
(3)重复(1)、(2)步骤6次。
(4)将尼龙毛摊在铺有纱布的方盘内,37℃温箱干燥2~3天后,贮藏在带盖的方盘内。
(1)取50ml玻璃注射器,拔去注射芯,在注射器头上套一段带夹子的胶管。
(2)将尼龙毛梳理,并适当折叠,以适应注射器的直径,填入注射器内,约20ml的体积。
(3)将填好尼龙毛的注射器连同注射器芯一起包好,高压灭菌。

(1)将注射器固定在支架上,倒入37℃的细胞培养液,关闭阀门一
定时间,然后打开阀门,放掉细胞培养液,以清洗几次尼龙毛,关上阀门。
(2)将要分离的细胞液用预先加温的培养液稀释成适当的浓度,×107个细胞/ml。
(3)将细胞液倒入注射器内,使之没过尼龙毛柱。盖上注射器,37℃温育45min
至1h。
(4)打开下口,缓慢放流(1滴/min),收集于离心管中。
(5)离心,即获所需的T淋巴细胞。
(四)注意事项
,T淋巴细胞也常有一部分被吸附,吸附的多少与尼龙毛的质量有关,与装柱的松紧也有关系。
%~30%。
,以盐水洗涤,,然后再同前法清洗.
B细胞,T细胞分离方法——尼龙毛柱法
1)尼龙毛柱的制备
,长度约10cm的尼龙毛, HCl浸泡处理过夜。用双蒸水洗净HCl,置37℃烘干备用。
,均匀分散,置Hanks液中浸泡。取1ml注射器,出口接塑料管并夹住。将尼龙毛均匀填塞入注射器中,排净空气,柱高约5~6cm。此柱可分离约2×107细胞。将柱置
-20℃可保存2~3个