E玫瑰花环形成实验.ppt

E玫瑰花环形成实验.pptE玫瑰花环形成(xíngchéng)实验
第一页，共21页。
掌握E花环形成的原理
熟悉E花环形成实验的步骤(bùzhòu)及光镜下E 花环的形态
熟悉磁珠分离的原理
实验(shíyàn)目的
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T细胞的表面分子是T细胞与其它细胞和分子间相互识别及作用的物质基础。它们在T细胞活化(huóhuà)、增殖和分化等过程中起重要作用。
TCR-CD3复合物参与T细胞的抗原识别和信号转导；
CD2、CD28、CTLA-4、CD45、CD40L 等膜蛋白参与T细胞活化(huóhuà)及T细胞与其它细胞间相互作用。
CD4/CD8分子辅助TCR识别结合抗原，参与信号转导；根据CD4和CD8分子的表达将其分为CD4+T和CD8+T细胞。
T细胞
CD2
CD3
TCR
CD8
密度梯度离心法
CD4
T细胞表面(biǎomiàn)分子
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依靠(yīkào)表面标记的分离方法
流式细胞术分离法：利用各种荧光素标记的表面标记特异性抗体(kàngtǐ)，使不同表面标记的细胞结合上不同的荧光素，借助荧光活化细胞分选仪将各种细胞分离开来。
*
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* 免疫磁珠分离法：将针对细胞某种表面(biǎomiàn)标记的特异性抗体包被在磁性微珠上，与磁珠交联的抗体能够特异性结合具有这种表面(biǎomiàn)标记的细胞，然后用强磁场可将具有这种表面(biǎomiàn)标记的细胞分离出来。
磁珠(microbead)
标记(biāojì)细胞上的磁珠在扫描电镜下也几乎看不到
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磁珠分离(fēnlí)策略：
一. 阳性(yángxìng)分选
磁珠标记(biāojì)目的细胞
未标记细胞先行流出
移出磁场后收集目的细胞
CD4+T细胞
分离柱
CD4-T细胞
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磁珠标记非目的(mùdì)细胞
目的(mùdì)细胞先行流出
二. 阴性(yīnxìng)分选
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成熟的人T细胞表面表达绵羊红细胞（SRBC）受体（即CD2分子），能与SRBC结合形成玫瑰花环样结构，可在光学显微镜下观察计数。本法可用于分离(fēnlí)外周血T细胞及检测T细胞的数量和比例。
E花环(huā huán)分离法原理
*
T
T
B
SRBC
CD2
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实验(shíyàn)材料
’s液
(fēnlí)液

、37℃温箱、显微镜等
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实验(shíyàn)方案
取外周血
绵羊(miányáng)红细胞
淋巴细胞
分离(fēnlí)
显微镜下观察
+
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