第18章重组dna技术.ppt

binantDNA◆DNA分子体外重组技术和核苷酸序列分析技术标志了基因工程时代的诞生。◆1973年,HerbertBoyer和StanleyCohen首次成功实现DNA分子的体外重组。◆1977年,FrederickSanger和WalterGilbert发明了DNA测序法。◆重组DNA技术(binantDNAtechnique):指在体外重新组合DNA分子,并使它们在适当的细胞中增殖的遗传操作。◆遗传工程(icEngineering):借助生物学技术,对生物遗传物质进行更改和/或重新组合,以改变生物的遗传性状或创造新的生物品种的遗传学研究技术。◆遗传工程有广义和狭义之别,狭义遗传工程专指重组DNA技术(即基因工程),广义遗传工程包括细胞水平的遗传操作(也称细胞工程)和基因工程。◆克隆:是英文“clone”或“cloning的音译,源于希腊文“Klone”,本意为无性繁殖系,即通过无性繁殖而产生的完全相同的子代集合体。bination酶功能限制性核酸内切酶识别特异性核苷酸序列切割DNADNA连接酶催化相邻DN***段的3'末端与5'末端生成磷酸二酯键DNA聚合酶催化合成DNA分子反转录酶以RNA为模板,催化合成cDNA碱性磷酸酶切除末端磷酸基末端转移酶在3'-羟基末端进行多聚物加尾多聚核苷酸激酶催化多聚核苷酸5'-羟基末端磷酸化,或用来标记探针重组DNA技术中常用工具酶一、限制性核酸内切酶(restrictionenzyme)◆限制性内切酶:又称限制性核酸内切酶,能识别结合双链DNA分子中的特异序列,并切割DNA。◆由三个斜体字母组成:EcoRI来源菌属名(Escherichia)的第一个字母菌的种名(coli)R来自菌株名罗马数字(I)代表该酶被发现的次序5'······3'3'···CCTAGG···5'BamHI5'······3'3'···CCTAGG···5'Ⅰ型、Ⅱ型和Ⅲ型三种类型(1)三型限制酶的基本特征◆Ⅰ型:具有内切酶和***化酶的双重活性,作用需ATP供能,能识别和结合于特定的DNA序列位点,但随机切断在识别位点以外的DNA序列(通常在识别位点周围400~700bp)。◆Ⅲ型:具有内切酶和***化酶的双重活性,作用需ATP供能,切割位点距离识别位点约25bp。(2)Ⅱ型限制性核酸内切酶◆只由一条肽链组成,不具有***修饰酶活性,不需要ATP◆识别位点一般为4~6碱基对组成的特异性序列。◆切割后可产生粘性末端,也可产生平头末端。5'突出的粘性末端5'······3'3'···CCTAGG···5'5'······3'3'···CCTAGG···5'BamHI5'···GAGCTC···3'3'···CTCGAG···5'5'···GAGCTC···3'3'···CTCGAG···5'SstI3'突出末端