免疫荧光-2.ppt

免疫荧光-2主要内容 一、荧光的特征 二、荧光素 三、荧光素标记抗体的方法 四、荧光抗体的质量鉴定 五、免疫荧光组化染色方法 六、荧光显微镜 七、非特异性荧光的消除方法八、激光扫描共聚焦显微镜思考题:??、间接法的原理和主要操作流程???一、荧光的特征分子都含有电子,电子在不停地运动着。根据量子理论,运动着的电子可以处于一系列不连续的能量状态中,电子遵守一定的规则,要以从一个能级向另一能级跃迁,并伴随着与能级差相对应的特定能量的吸收或释放。激发当电子吸收能量跃迁到较高能级,这个过程叫激发。发射以辐身方式跃迁时,能量转化成相应波长的光,这个过程叫发射。荧光跃迁到激发态的电子,大多处于单重激发态。如果电子直接从单重激发态以辐身方式跃迁到基态,由于单重激发态很不稳定,半衰期很短,发射持续的时间也很短,这种发射光,叫荧光。二、荧光素能够产生荧光并能作为染料的化合物称为荧光色素,必须具备:吸收激发光的光能并发射荧光。1、具备用于标记抗体的荧光素条件(1)应具有与蛋白质分子形成共价键的化学基团,结合后不易离解,而未结合的色素及其降解产物易排除。