脐血干细胞体外分化为肝样细胞的实验分析.docx

安徽医科大学硕士学位论文
英文缩略词表(Abbreviation)
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ALB albumin 白蛋白
AFP alpha—fetoprotein 甲胎蛋白
CKs cytokines 细胞因子
CK一18 cytokeratin一1 8 细胞角蛋白18
DAB Diaminobenzidine 二氨基联苯***
d day 天
达尔伯克(氏)改良伊
DMEM o’S modified eagle medium
格尔(氏)培养基
FBS Fetal bovine factor 胎牛血清
FCM flow cytometor 流式细胞仪
FGF一4 fibroblast growth factor-4
FITC fluorescein isothicyanate 异硫***酸荧光素
h hour 小时
HES hydroxyethyl starch 羟乙基淀粉
HGF hepocyte growth factor 肝细胞生长因子
IHC immunohistochemistry 免疫组织化学
mln minute 分钟
M【NCs mononuclear ceils 单个核细胞
OSM oncostatin M 制瘤素
PLL ploy 1 lysine (氏)
PAS periodic acid—schiff
染色反应
PBS phosphate—buffered sal ine 磷酸盐缓冲液
安徽医科大学硕士学位论文
IUA radioimmunoassay 放射免疫分析法
SC stem cell 干细胞
TNCs total nuclear cells 有核细胞总数
TB typan blue 台盼蓝
UCB umbilical cord blood 脐带血
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学位论文独创性声明
本人所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确说明并表示谢意。
学位论文作者签名:臀孑
日期:≥扭口工
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学位论文作者签名: 禅瓷 导师签名:
日期:彦萨9.。< 日期:瑚6&
安徽医科大学硕士学位论文
脐血干细胞体外分化为肝样细胞的实验研究
研究生 程军
导师 马勇教授(安徽医科大学临床药理研究所,抗炎免疫药理学安徽省重点实验室,安徽省中药
研究与开发重点实验室,抗炎免疫药物安徽省工程技术研究中心,
安徽省高校中药抗炎免疫药理学科技创新团队)
摘要
目的:在体外分别采用有细胞因子的培养体系和无细胞因子的培养体系,探讨人脐血干细胞是否可以在体外培养条件下诱导分化为肝细胞样细胞,观察肝细胞标志物的表达,以期为治疗肝脏疾病提供了新的细胞来源。
方法:常规无菌采集新鲜脐血,采用6%羟乙基淀粉、淋巴细胞分离液分离脐血(umbilical cord )的单个核细胞(mononuclear cells,MNCs)。MNCs分组培养,对照组不加细胞因子,实验组加入重组人肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)、重组人成纤维生长因子4(fibroblast growth ,FGF一4)和重组人制瘤素(oncostatin M,OSM),浓度分别为20pg/L、lO}tg/L、101xg/L。并于诱导前及诱导后的第7,14,21,28d采用免疫细胞化学染色检测甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、细胞角蛋白18(cytokeratin 18,CKl8)、白蛋白(albumin,ALB) 和肝细胞抗原的表达,用PAS(periodic )法进行糖原染色,流式细胞
仪(flow cytometry,FCM)检测细胞中ALB+表达,采用间接免疫荧光方法分析各组细胞ALB的表达情况,并用放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)检测细胞培养液中AFP的分泌水平,分析是否诱导出肝细胞样细胞。
安徽医科大学硕士学位论文
结果:
,21d后基本