高粱抗丝黑穗病菌3号生理小种的scar标记的制作方法.docx

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。,可将重组率转换为遗传距离即是图距单位(an,cM)、纯化、克隆与鉴定将回收纯化的片段克隆于pMD18-TVector载体上。在ABIPRISMTM377XL测序仪上进行测序。,从序列两端按引物的要求设计出一对20-24碱基的引物,引物由宝生物工程(大连)有限公司合成。,25mmol/LMgCl22·5μ1,lOmmol/,υ/,10μπιο1/,DNA模版10ng,用ddwatwe补足25μI。扩增参数94°C5min—(94°C变性20s—57°C退火30s—72°C延伸40s)35次循环一72°C延伸IOmin—4°C保存。用这对引物检测7050B(抗亲)、Tx622B(感亲)及二者杂交后的F2抗池、感池和单株,比较其与RAPD分析的一致性和可靠性。实施例1与抗丝黑穗病基因连锁的RAPD多态性标记的获得本发明用400对(S1_S400)RAPD引物对亲本及其F2代群体进行了标记分析。其中的355对引物扩增出产物,45对未扩增出产物,%。其中引物S18在抗亲、感亲及其F2代群体扩增出一条稳定的差异谱带,根据Maker显示片段大小大在850bp左右,引物S336在抗亲、感亲及其F2代群体扩增出二条稳定的差异谱带,根据Maker显示片段大小分别是1500bp和700bp左右(见图1),对这三个差异谱带进行了共分离分析,共分析了144株F2代个体,其中抗丝黑穗病96株,感丝黑穗病48株,分析结果表明,%、%%(见图2,3)。实施实例2与抗丝黑穗病基因连锁的RAPD标记的回收及测序将与抗丝黑穗病基因连锁的S18799、S336-l1419和S336_2716三条多态性片段回收测序,测序结果表明三条差异片段大小分别为