中药寡糖研究进展△.docx

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1NaOH溶液作为A液,100mmol·L–1NaOH+500mmol·L–1NaOAc混合溶液作为B液,组成流动相进行梯度洗脱,满足了HPAEC-PAD对于色谱柱和流动相的要求。色谱图反映葡萄糖、果糖、蔗糖、1-蔗果三糖、耐斯糖、1F-,说明分离效果好。(CE)CE是以毛细管为分离通道,高压直流电场作为驱动力,具有样品需求量少、灵敏度高、分离效率高的优点,应用于糖类分析的主要有毛细管区带电泳(CZE)、毛细管凝胶电泳(CGE)及胶束电动毛细管电泳(MEKC)。CZE中寡糖需要带电,方法包括在硼酸盐缓冲液中与硼酸根络合,在强碱缓冲液中电离,进行衍生化,接着带电寡糖在缓冲液中和电场作用下因淌度不同而实现分离。CZE是电泳法中相对简便,应用广泛的一种分离方法。孙燕[41]在降解褐藻胶时发现,酶降解所得寡糖在非还原端碳4、5位形成双键与碳6位的羧基中的羰基共轭,在235nm处具有特征紫外吸收,于是不经衍生,直接经高效毛细管电泳-紫外分光检测方法(HPCZE-UV)分离检测了酶降解产物;酸降解所得寡糖无此共轭体系,并没有特征紫外吸收,也没有荧光发光基团,如果直接分析检测就比较困难,便将酸降解寡糖与8-氨基芘-1,3,6-三磺酸钠(APTS)荧光衍生化试剂反应,并优化了衍生化条件和电泳条件,经HPCZE-激光诱导荧光检测法(LIF)实现了高效分离,检测限达到了1×10–17mol水平。CGE是从区带电泳中派生出来的把凝胶作为毛细管中支持物的电泳方式。一方面,凝胶在管中起到分子筛的作用;另一方面,由于凝胶黏度大,又可以减少溶质的扩散。MEKC是通过在缓冲液中加入表面活性剂,使其形成胶束作为准固定相。中性物质在水相和该相的分配系数不同而得到分离,达到与CZE互补的效果,扩大电泳法的分离范围。(FACE)FACE是通过衍生化反应使糖还原端结合上荧光基团,然后在一定浓度的聚丙烯酰***凝胶上进行分离的一种分析方法,可以根据电泳条带数量及荧光强度来判断出寡糖的成分及相对含量,直观易读,具有高分辨率和高灵敏度。目前,有若干种衍生方法和相应的衍生试剂,其中8-氨基萘基-1,3,6-三磺酸(ANTS)应用较多,不仅为糖分子提供了荧光基团,还提供了3个负电荷,使原来的中性糖分子带电,有足够的动力在电场力作用下进行电迁移。姚喜梅等[42]从ANTS、2-氨基苯甲酸(2-AA)和2-氨基吖啶***(AMAC)中选择葡甘露寡糖的荧光衍生剂时,发现ANTS组条带更加清晰且数量更多,因此确定ANTS为实验荧光衍生剂,并从分离胶浓度、ANTS用量、衍生化反应温度、衍生化反应时间等方面对衍生条件进行了优化。李晓霞等[4]将黄芪多糖经内切-1,4-β-半乳聚糖酶降解寡糖同样用ANTS衍生,通过FACE获得糖指纹图谱,结合主成分分析,找出了区分不同种质资源黄芪的差异性糖组分。